Mikrobiologie cviko posledni pokracovani

Stanovení množství mikroorganismů
analýza NK
kvalitativní – stanovení počtu určité skupiny mikroorganismů
kvantitativní – testy na důkaz ne/ přítomnost mikroorg.
Přímé metody
počítání buněk pomocí mikroskopu
počítací komůrka
zbarvený preparát /př: fluorescenční mikroskopy)
elektronové mikroskopie
biomasa
stanovení objemu buněk
vážení (stanovení biomasy, spektrofotometr)
Nepřímé metody
kultivační metody (počet buněk)
přítomnost nebo kvalita MO je dána až po kultivaci
metoda desková (přeliv, nátěr)
membránová filtrace
Přeliv: vzorek je naředěný a naočkovaný na Petriho misce a zalije se agarem
Nátěr: do misky s tuhám agarem se otře kultura
Média:
selektivní – pro určitý druh MO
elektivní – pro širokou skupinu MO
Chromegení média
přídavek látky, která je štěpena enzymem specifickým pro druh, rod, skupinu MO a umožní jejich odlišení od ostatních MO, tato látka se váže na barevný indikátor a dojde k jejímu rozštěpení specifickým enzymem
následně se počítají kolonie případně barvení
metoda maximálního ředění
mikrobiotesty
membránová filtrace při stanovení O, které se vyskytuje ve velmi malém počtu nebo ve velkých objemech, Enterococus, používají se filtry s póry 0,2 – 4,54 um, bakterie se zachytí na filtr – ztuhlý agar – kolonie na filtru
Chemické (biochemické)
identifikace MO, substrát obsahuje cukry a jeho deriváty u kterých je inhibovaná suspenze
kvantitativní – stanovení buň. komponentů (biomasa), určení sušiny (spektrofotometr nebo vážením)
DNA
kys muramová
kys. diaminofimulová
chitin
Fyzikální
Turbidimetrie
nárůst MO se projeví zákalem, pomocí měření optické denzity při specifické vrstvě, vlnová délka 420 – 620 um, výsledkem měření je růstová křivka
měření vodivosti
využívá se, že MO se množí a metabolizuje org. elektricky nenabité látky a dál to nejde přečíst....
Mikrobiologie pitné vody
Definice pitné vody:
voda nezávadná, která po dlouhodobém užívání nezpůsobuje onemocnění a zdravotní poruchy
Druhy pitných vod:
pitná voda /PV) – bez MO, parazitů a látek v jakémkoli počtu nebo koncentraci, které by mohli ohrozit lidské zdraví
balená voda (BV)
Hodnocení kvality pitných vod:
asi 60 ukazatelů, z to ho 10 mikrobiologických a biologických
50 ukazatelů je fyzikálně-chemické
Mezní hodnota (MH) nepřestavuje absolutní riziko (když ukazatel překračuje hodnoty, nepředstavuje nebezpečí, ale ze zákona ho musí být upraveno na standart)
Nejvyšší mezní hodnota (NMH) – představuje zdravotně závažný ukazatel, při překročení je voda označena jako nepitná (Coliformní gakterie, Clostridium...)
Mezní hodnota referenčního rizika – zahrnuje ukazatele s pozdním toxickým účinkem – způsobuje obtíže až po určité době (karcinomy, těžké kovy...), při překročení je voda označena za nepitnou
Mikrobiologické parametry pitné vody:
nejdůležitější indikátory fekálního znečištění (množství E. Coli – při stanovení fekálního znečištění, bakterie trávicího traktu
koliformí bakterie – indikátorem celkového fekálního znečištění
enterokoky – alternativní indikátory fekálního znečištění, ožné stanovit i na starších vzorcích
mezofilní bakterie – počty kolonií při 36 C (optimum 25 – 40) zdrojem je voda, půda, výkaly, rostliny, prach...
psychrofilní bakterie – počty kolonií při 22 C – pochází z půdy, výkalů, rostlin
pseudomonas aeruginosa, Clostridium perfringers
Poměrem EC a EK lze zjistit, zda vodu znečistil člověk nebo zvířata.více než 4 kolonie EK, jedná se o znečištění lidského původu a více než 0,7 kolonií, jedná se o znečištění animálního původu.
Lidský původ je nebezpečnější, protože může obsahovat lidské patogeny. Zvířecí patogeny člověku ublížit mohou a nemusí.
Hodnoty pro pitnou vodu (KTJ)
Skupina
Typ limitu
PV
BV
EC
NMH
0/100 ml
0/250 ml
KB
MH
0/100 ml
0/100 ml
EL
NMH
0/100 ml
0/250 ml
PA
NMH
-
0/250 ml
CP(
MH
0/100 ml
-
36 C
MH/NMH
100/1ml
20/1 ml
22 C
MH/NMH
200/1 ml
500/1 ml((
500/1 ml
( pouze u pitných vod upravených z povrchových
(( náhradní zásobování, voda dodávaná dopravními prostředky, malé zdroje do 5m/den
Při překročení limitů se používá dezinfekce
stříbro, měď, chlor (plynný, savo, chloramin), ozon, UV a gama záření
Chemicko – fyzikální parametry pitné vody: