Studijní materiály

Zpět

Hromadně přidat materiály

Protokol_03

AMOL - Úvod do molekulární biologie a genetiky

Hodnocení materiálu:

Zjednodušená ukázka:

Stáhnout celý tento materiál

ová cytometrie), umožňující měření obsahu DNA v jednotlivých buňkách.
úkol 1: Pozorování morfologie kvasinkových cdc mutant
Materiál:
Kultura kvasinek Saccharomyces cerevisiae s termosenzitivní mutací v genu CDC28 (cdc28 mutanty), základní mikroskopické pomůcky.
Provedení:
Buňky S.cerevisiae (cdc28 mutanty) byly kultivovány přes noc v permisívní teplotě (24°C), potom byla část buněk na 5 hodin převedena do restrikční teploty (37°C). Připravte nativní preparáty z obou kultur, pozorujte a zakreslete morfologii buněk v obou kulturách. Porovnejte fenotyp buněk mutanty rostoucí v permisívní a restrikční teplotě a podle morfologie buněk se pokuste zjistit, zda došlo k zástavě buněčného cyklu, případně ve které fázi.
M-fáze G1-fáze
G2-fáze S-fáze
Výsledky:
Závěr:
úkol 2: hodnocení růstových křivek kvasinek
Materiál:
Kultury kvasinek Saccharomyces cerevisiae (kontrolní diploidní kmen - tzv. wild type, termosenzitivní cdc28 mutanta v restrikční i permisívní teplotě), spektrofotometr, milimetrový papír s logaritmickou stupnicí.
Provedení:
Kvasinky byly kultivovány v tekuté živné půdě - kontrolní kmen při 24oC, cdc28 mutanta při 24oC (permisivní teplota) a při 37oC (restrikční teplota). Růst kultur byl průběžně sledován měřením absorbance buněčných suspenzí spektrofotometrem při vlnové délce 560 nm v intervalech 60, resp. 120 minut. Výsledky měření jsou uvedeny v tabulce. Ze zjištěných hodnot sestrojte na milimetrový papír s logaritmickou stupnicí růstové křivky a z nich odečtěte délku buněčného cyklu jednotlivých typů buněk.
Výsledky:
čas (hod)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
wild type
0,165
0,305
0,456
0,740
0,993
1,225
1,414
1,515
1,703
1,760
-
cdc/24oC
0,035
-
0,055
-
0,134
-
0,273
-
0,480
-
0,482
cdc/37oC
0,024
-
0,009
-
0,016
-
0,024
-
0,019
-
0,020
délka buněčného cyklu (T):T = t . log 2 / log (X/X0) ,
kde: t = časový interval odečítání
X0 = počet buněk (biomasa) na počátku odečítání
X = počet buněk (biomasa) na konci odečítání
Závěr:
úkol 4: analýza obsahu DNA v buňkách kvasinek metodou flow cytometrie
Materiál:
Kultura kvasinek Saccharomyces cerevisiae (termosenzitivní cdc28 mutanta v restrikční teplotě), barvivo propidium iodid, průtokový

Stáhnout celý tento materiál

Předchozí

1 2 3

Další

Vloženo: 26.05.2011

Velikost: 122,50 kB

Stáhnout celý tento materiál

Komentáře

Tento materiál neobsahuje žádné komentáře.

Mohlo by tě zajímat:

Skupina předmětu AMOL - Úvod do molekulární biologie a genetiky
Reference vyučujících předmětu AMOL - Úvod do molekulární biologie a genetiky