- Stahuj zápisky z přednášek a ostatní studijní materiály
- Zapisuj si jen kvalitní vyučující (obsáhlá databáze referencí)
- Nastav si své předměty a buď stále v obraze
- Zapoj se svojí aktivitou do soutěže o ceny
- Založ si svůj profil, aby tě tví spolužáci mohli najít
- Najdi své přátele podle místa kde bydlíš nebo školy kterou studuješ
- Diskutuj ve skupinách o tématech, které tě zajímají
Studijní materiály
Hromadně přidat materiály
Protokol_11
AMOL - Úvod do molekulární biologie a genetiky
Hodnocení materiálu:
Zjednodušená ukázka:
Stáhnout celý tento materiálistých označených zkumavek Eppendorf přepipetováno 5 l PCR produktu, které se smíchají s 1 l 10x NEB pufru č. 2 a 3,5 l vody a 0,5 l enzymu Hinf I. Po důkladném promíchání a krátké centrifugaci ve stolní mikrocentrifuze jsou vzorky inkubovány při teplotě 37 °C minimálně 3 hodiny. Vzorky jsou po inkubaci zamraženy a uschovány do dalšího týdne pro elektroforetickou analýzu.
10 l každého vzorku je smícháno s 2,5 l 5x nanášecího pufru pro elektroforézu a naneseno na připravený gel. 2,5% agarózový gel připravíme tak, že rozmícháme 2,5 g agarózy ve 100 ml TAE pufru a rozvaříme v mikrovlnné troubě po dobu 90 sekund. Po ochlazení agarózy na cca 50 °C přidáme 5 l ethidium bromidu, nalijeme agarózu do vaničky a vložíme hřebínek. Po zatuhnutí vložíme gel do elektroforetického aparátu, vyjmeme hřebínek a naneseme vzorky. Zařízení přiklopíme a aplikujeme elektrické napětí 130 V po dobu 20-30 min. Poté gel vyjmeme (pracujeme v rukavicích), položíme do dokumentačního zařízení a vyfotografujeme.
Výsledky:
Vyhodnocení gelu provedeme podle následujícího klíče:
Pacient 1: MTHFR C677Tnegativní
Pacient 2: MTHFR C677Tpozitivní / heterozygot
Pacient 3: MTHFR C677Tpozitivní / homozygot
Odečteme elektroforetogram od čtyř vyšetřených pacientů a genotyp zapíšeme do tabulky:
Pacient
MTHFR C677T (+/-)
homozygot / heterozygot
A
B
C
D
Závěr:
Kontrolní Otázky:
Jaká další vyšetření navrhnete u pacientů s pozitivním výsledkem testu?
Jaká další opatření navrhnete u pacientů s pozitivním výsledkem testu?
Jaké jsou možné zdroje chyb při provedení experimentu?
Proč se cílové místo Hinf I používá k detekci mutace C677T?
Praktické cvičení bylo provedeno dne:Podpis vyučujícího:
Vloženo: 26.05.2011
Velikost: 52,50 kB
Komentáře
Tento materiál neobsahuje žádné komentáře.
Copyright 2025 unium.cz
