- Stahuj zápisky z přednášek a ostatní studijní materiály
- Zapisuj si jen kvalitní vyučující (obsáhlá databáze referencí)
- Nastav si své předměty a buď stále v obraze
- Zapoj se svojí aktivitou do soutěže o ceny
- Založ si svůj profil, aby tě tví spolužáci mohli najít
- Najdi své přátele podle místa kde bydlíš nebo školy kterou studuješ
- Diskutuj ve skupinách o tématech, které tě zajímají
Studijní materiály
Hromadně přidat materiály
Protokol_11
AMOL - Úvod do molekulární biologie a genetiky
Hodnocení materiálu:
Zjednodušená ukázka:
Stáhnout celý tento materiáldATP, dTTP, dCTP, dGTP), restrikční endonukleáza Hinf I (New England Biolabs - NEB), pufr pro Hinf I (NEB č. 2), TAE pufr pro elektroforézu (obsahující Tris, acetát, EDTA), agaróza, zařízení pro DNA elektroforézu, DNA standard pro elektroforézu (100 bp, NEB), 5x nanášecí pufr pro elektroforézu, mikrovlnná trouba, ethidium bromid (10 mg/ml), dokumentační systém pro DNA elektroforézu.
Poznámka:
Ethidium bromid se váže na DNA a je mutagenní, je proto třeba používat při veškeré manipulaci s gely gumové rukavice na jedno použití.
Všechny enzymy je nutno uchovávat v chladící krabičce, která udržuje jejich teplotu nižší než 0 °C.
Cílová sekvence restrikčního enzymu Hinf I: 5´…G(ANT C…3´
3´…C TNA(G…5´
(N = jakýkoliv ze 4 nukleotidů: A, C, G, T)
Provedení:
Složení amplifikační směsi je uvedeno v tabulce. Připravíme master mix podle této tabulky a důkladně jej promícháme. Poté odpipetujeme do 4 PCR mikrozkumavek alikvotní podíly pro jednotlivé reakce (25 l) a přidáme 3 l DNA od pacientů. Po krátké centrifugaci ve stolní centrifuze jsou vzorky připraveny k amplifikaci.
1 reakce
Master mix
pro 4 reakce
Voda pro mol. biologii
20
80
10x pufr pro PCR
3
12
Pracovní dNTP (10 mM každý)
1
4
Mthfr1 (3 pmol)
1,5
6
Mthfr2 (3 pmol)
1,4
5,6
Taq polymeráza
0,1
0,4
DNA
3
0
Celkem
30 l
108 l
Amplifikace probíhá v PCR termocykleru (program A:48 MTHFR) za následujících podmínek: 2 minuty při teplotě 94 °C, následuje 30 cyklů, při kterých se střídají teploty 94 °C / 20 s, 62 °C / 20 s a 72 °C / 20 sekund. Po ukončení cyklů jsou vzorky vystaveny teplotě 72 °C po dobu 2 minut.
Po amplifikaci je do č
Vloženo: 26.05.2011
Velikost: 52,50 kB
Komentáře
Tento materiál neobsahuje žádné komentáře.
Copyright 2025 unium.cz
