- Stahuj zápisky z přednášek a ostatní studijní materiály
- Zapisuj si jen kvalitní vyučující (obsáhlá databáze referencí)
- Nastav si své předměty a buď stále v obraze
- Zapoj se svojí aktivitou do soutěže o ceny
- Založ si svůj profil, aby tě tví spolužáci mohli najít
- Najdi své přátele podle místa kde bydlíš nebo školy kterou studuješ
- Diskutuj ve skupinách o tématech, které tě zajímají
Studijní materiály
Hromadně přidat materiály
Protokol_10
AMOL - Úvod do molekulární biologie a genetiky
Hodnocení materiálu:
Zjednodušená ukázka:
Stáhnout celý tento materiálpro restrikční štěpení (NEB č. 4), 10x roztok BSA (bovinní sérový albumin – jeho přítomnost je nutná pro funkci restiktáz Spe I a Cla I), TAE pufr pro elektroforézu, agaróza, zařízení pro DNA elektroforézu, DNA standard pro elektroforézu (1 kb, NEB), 5x nanášecí pufr pro elektroforézu, mikrovlnná trouba, ethidium bromid (10 mg/ml), dokumentační systém pro DNA elektroforézu.
Poznámka:
Ethidium bromid se váže na DNA a je mutagenní, je proto třeba používat při veškeré manipulaci s gely gumové rukavice na jedno použití.
Všechny enzymy je nutno uchovávat v chladící krabičce, která udržuje jejich teplotu nižší než 0 °C.
Cílová sekvence restrikčního enzymu Cla I: 5´…AT(CG AT…3´
3´…TA GC(TA…5´
Cílová sekvence restrikčního enzymu Spe I: 5´…A(CTAG T…3´
3´…T GATC(A…5´
Provedení:
Připravíme 3 paralelní reakce štěpení plazmidu pDS1 podle tabulky. Po důkladném promíchání a krátké centrifugaci ve stolní mikrocentrifuze jsou vzorky inkubovány při teplotě 37 °C 60-75 minut. Vzorky jsou po inkubaci podrobeny elektroforetické analýze.
V mezičase si připravíme gel. 1% agarózový gel připravíme tak, že rozmícháme 1 g agarózy ve 100 ml TAE pufru a rozvaříme v mikrovlnné troubě po dobu 90 sekund. Po ochlazení agarózy na cca 50 °C přidáme 5 l ethidium bromidu, nalijeme agarózu do van
Vloženo: 26.05.2011
Velikost: 64,50 kB
Komentáře
Tento materiál neobsahuje žádné komentáře.
Copyright 2025 unium.cz
