1-cviceni-ABCH-10

ii se často setkáváme s pojmem zřeďovací poměr, který vyjadřuje 1 díl původního
roztoku ku D dílům celkového objemu (1 : D = V
původní
: V
konečný
). Roztok zředěný 1 : D je totéž co D-krát zředě-
ný roztok, např. roztok zředěný 1 : 5 je roztok připravený z 1 dílu původního roztoku a 4 dílů rozpouštědla (tj.
5krát zředěný).
Biochemický ústav LF MU 1. cvičení

5
PRAKTICKÁ ČÁST

Úkol 1.1 Odměrné nádoby a další pomůcky v chemické laboratoři
Materiál: Kádinka, Erlenmeyerova baňka, odměrná baňka, odměrný válec, titrační baňka, zkumavky, mik-
rozkumavky typ Eppendorf, skleněná dělená a nedělená pipeta, pipetovací nástavec, byreta, pipeto-
ry se špičkami, plastová Pasteurová pipeta.
Provedení:
ƒ Seznamte se s pomůckami používanými k odměřování kapalin a k přípravě a uchovávání
roztoků.
" 1. Načrtněte demonstrované pomůcky do protokolu spolu s jejich využitím.

Úkol 1.2 Použití „air displacement“ pipetorů
Zásady správného postupu
ƒ Používat špičky specifikované výrobcem dávkovače. Špičky jsou určeny pro jedno použití.
ƒ Vytemperovat pipetor na stejnou teplotu, jako byla teplota kalibrace (většinou pokojová).
ƒ Vytemperovat odměřovanou kapalinu na stejnou teplotu, jako je teplota mikropipetoru.
ƒ Při manipulaci vždy držet pipetor s naplněnou špičkou ve svislé poloze.
ƒ Propláchnout vždy špičky (2–5krát) odměřovanou kapalinou před vlastním pipetováním.
ƒ Při nasávání kapaliny ponořit špičku 2–5 mm pod hladinu odměřované kapaliny.
ƒ Při výměně špiček používat odhazovač špiček.
ƒ Měnit špičku vždy, když na konci nebo uvnitř špičky zůstává vzorek po předchozím pipetování.
ƒ Při používání manuálních pipetorů ovládat píst pomalu a plynule palcem.
ƒ U nastavitelných pipet nejprve nastavit poněkud vyšší objem a pak jej snížit na požadovaný nižší.
Schéma přímého pipetování







Výchozí poloha
Stisk do 2. polohy
Stisk do 1. polohy
1 2 3 4
Biochemický ústav LF MU 1. cvičení

6
Postup přímého pipetování
1. Nasaďte na dávkovač špičku. Stiskněte tlačítko ovladače do první polohy (nutno překonat
malý odpor při stisku tlačítka).
2. Ponořte špičku dávkovače asi 2–5 mm pod hladinu roztoku. Pomalu povolujte stisknuté tla-
čítko ovladače za současného nasátí vzorku do špičky.
ƒ Vždy sledujte, zda do špičky nevnikly bublinky vzduchu (např. při prudším
povolení pístu ovladače nebo špatně nasazené špičce).
ƒ Vyšší přesnosti při pipetování dosáhnete, když úplně sundáte palec z tlačítka
ovladače, jakmile dosáhne výchozí polohy.
ƒ Pomalu vytáhněte špičku z kapaliny. Při rychlém vytažení se může ztratit část
obsahu špičky. Před vytažením špičky z kapaliny počkejte, hlavně u větších
pipetorů 500–5000 μl, asi 1–3 vteřiny.
ƒ Je-li potřeba, buničinou lehce z boku pohybem shora dolu otřete kapky, které ulpěly na
vnější stěně špičky. Nikdy se nedotýkejte špičky zezdola, abyste neodsáli z obsahu špičky.
3. Při vytlačování daného objemu kapaliny držte špičku v mírném úhlu proti stěně nádoby (10–
45º), těsně nad roztok již přítomný a plynule stiskněte tlačítko ovladače palcem do první po-
lohy. Vyčkejte asi 1 vteřinu a pokračujte v rychlém stisku tlačítka ovladače až do druhé po-
lohy (pocítíte větší odpor při stisku). Dbejte na to, aby nezůstaly kapičky kapaliny ve špičce
nebo nebyly rozstříknuté na stěnách nádoby.
4. Podržte tlačítko ovladače zmáčknuté a vytáhněte špičku podél stěny nádobky ven. Nyní
povolte tlačítko ovladače.
Materiál: Kádinka, zkumavky, nastavitelné pipetory se špičkami.

Provedení:
ƒ Určete pro jaký rozsah objemů je pipetor určen a nejmenší krok nastavení objemu.
ƒ Nastavte na pipetoru maximální nominální objem.
ƒ Nasaďte na pipetor špičku.
ƒ Propláchněte špičku několikrát demi-vodou.
ƒ Odměřte do zkumavky nastavený objem demi-vody.
Biochemický ústav LF MU 1. cvičení

7

Úkol 1.3 Příprava roztoků skalice modré o dané koncentraci
Materiál: Zásobní roztok skalice modré obsahující 124,85 g CuSO
4
.5H
2
O v 1 l roztoku. Zkumavky 10 ml,
zátky, nastavitelné pipetory 100–1000 a 500–5000 µl , špičky.
Provedení:
ƒ Do první zkumavky odměřte 1 ml zásobního roztoku CuSO
4
. Přidejte takové množství
vody, aby výsledná koncentrace roztoku ve zkumavce byla přesně 0,1 mol/l.
ƒ Do druhé zkumavky odměřte 640 µl zásobního roztoku CuSO
4
a 960 µl vody.
ƒ Zkumavky uzavřete zátkou a obsah promíchejte jejich převrácením.

" 2. Vypočítejte: a) látkovou koncentraci CuSO
4
v zásobním roztoku;
b) hmotnostní koncentraci CuSO
4
v roztoku v 1. zkumavce;
c) látkovou i hmotnostní koncentraci CuSO
4
v roztoku ve 2. zkumavce.
M
r
(CuSO
4
.5H
2
O) = 249,69
" 3. Kolikrát byl základní roztok skalice v první a druhé zkumavce zředěn?
" 4. Vypočítejte hmotnostní a látkovou koncentraci CuSO
4
v roztoku, který vznikne smícháním
a) 5 ml základního roztoku skalice modré a 45 ml vody;
b) 4 ml základního roztoku v první zkumavce a 2 ml roztoku ve druhé zkumavce.