Studijní materiály

Zpět

Hromadně přidat materiály

5-cviceni-ABCH-10

ABCH - Biochemie

Hodnocení materiálu:

Zjednodušená ukázka:

Stáhnout celý tento materiál

řítomný v séru, je pak dalším enzymem
cholesteroloxidázou oxidován na cholestenon. Současně vzniká peroxid vodíku, který za katalýzy
peroxidázou reaguje s 4-aminofenazonem a fenolem na červeně zbarvený produkt.
Materiál: Set CHOL firmy Roche Diagnostics
*
: činidlo (obsahující Tris pufr 100 mmol/l, pH 7,7; Mg
2+
50 mmol/l;
4-aminofenazon 1 mmol/l; cholát sodný 10 mmol/l; fenol 6 mmol/l; 3,4-dichlorfenol 4 mmol/l, polyglykolether
0,3%; cholesterolesteráza ≥ 6,67 µkat/l; cholesteroloxidáza ≥ 4,17 µkat/l; peroxidáza ≥ 3,33 µkat/l). Kalibrační
roztok cholesterolu, vzorky krevních sér, sada zkumavek, pipetory pro objem 20 µl a 2 ml.
*
Alternativně mohou
být použity testy ostatních výrobců, pak složení činidla je odlišné.
Provedení:
Do čistých, označených zkumavek pipetujte podle schématu:
Roztok (ml) Slepý pokus Vzorek Standard
Činidlo 2,0 2,0 2,0
Demi-voda 0,02 - -
Sérum - 0,02
Kalibrační roztok - - 0,02
Promíchejte a po 10 minutách změřte absorbance vzorku A
x
a standardu A
STD
při 500 nm
proti slepému pokusu. Zbarvení je stále asi hodinu.

Výpočet koncentrace celkového cholesterolu v séru:
STD
STD
x
x
c
A
A
c ×=
kde c
STD
je koncentrace cholesterolu v kalibračním roztoku (je uvedena na štítku nádobky).

Biochemický ústav LF MU 5. cvičení
35
b) analyzátorem Reflotron
®

V reakční zóně proužku jsou obsaženy enzymy cholesterolesteráza, cholesteroloxidáza, peroxidáza a
chromogenní substrát dimethylbenzidin. Principem stanovení je sled enzymových reakcí popsaných
v úkolu 5.1. Vzniklé zbarvení je vyhodnoceno na reflektančním principu.
Materiál: Analyzátor Reflotron
®
s proužky na cholesterol, mikropipeta 30 µl, lancety nebo sterilní jehly, Ajatin, tampóny
z buničiny.
Provedení:
Otevřete dvířka měřící komůrky.
Odstraňte fólii chránící proužek.
S použitím mikropipety odeberte přesně 30 µl kapilární krve (provede laboratorní
asistentka).

Odběr kapilární krve. Při odběru kapilární krve je nutno dodržovat určité zásady:
• vyšetřovaná osoba si umyje ruce v teplé vodě (prohřátím místa vpichu se zabezpečí dobré prokrvení)
• místo vpichu dezinfikovat
• vpich směřovat ze strany do bříška prstu (paty), kde je lepší prokrvení než ve středu
• po nabodnutí lancetou první kapku otřít (příměs tkáňového moku), další tvorbu kapek podpořit lehkým
tlakem (při silném vymačkávání je v krvi příměs tkáňového moku)
• po odběru přiložit na místo vpichu vatu smoče

Stáhnout celý tento materiál

Předchozí

1 2 3

Další

Vloženo: 26.05.2011

Velikost: 176,84 kB

Stáhnout celý tento materiál

Komentáře

Tento materiál neobsahuje žádné komentáře.

Mohlo by tě zajímat:

Skupina předmětu ABCH - Biochemie
Reference vyučujících předmětu ABCH - Biochemie